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目的

靈長類獸醫協會(APV，Association of Primate Veterinarians)意識到在非人類靈長類動物(NHP，Non-human primate)中，腦脊液(CSF，Cerebro-Spinal Fluid)的采集可能對于臨床和生物醫學研究都是必需的。由于這項技術存在固有風險，實驗動物獸醫應確定腦脊液采集對臨床評估的必要性和實用性。為了生物醫學研究目的而進行腦脊液采集須在動物護理和使用委員會(IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee)或等同的監管機構批準下進行。以下建議為IACUC、使用非人類靈長類動物模型的研究人員以及獸醫人員提供基本信息，以供在制定腦脊液采集相關的政策和標準操作程序(SOP，Standard Operating Procedure)時予以考慮。>>>商務洽談，點此處，在線咨詢

背景

腦脊液分析是一種強大的工具，可加強對中樞神經系統內發生的各種過程的檢測，例如：出血、炎癥、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對腦脊液中化合物(如激素、藥物、神經遞質、生物標志物、代謝產物和病毒)進行系列評估，在基礎研究和轉化研究中同樣非常重要。中樞神經系統中的腦脊液體積可通過腦脊液的分泌和吸收而維持穩定。

操作注意事項

腦脊液通常通過腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過腰椎穿刺采集腦脊液的并發癥風險相對較低。因為在大多數非人類靈長類動物中，腰椎穿刺位點遠離脊髓的末端。應適當麻醉動物，并使用無菌技術進行操作，包括剃毛等術部準備和無菌材料的使用。至少需使用無菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無菌手術創巾。腦脊液采集通常以側臥位、胸骨臥位或坐位進行，分別通過頸部或脊柱的屈曲來改善對腦池的進入或擴大椎間隙(Gereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。選擇的針頭尺寸和長度應適合非人類靈長類動物的種屬和體型(Brady，2000;Cereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。操作時使用的技術、設備和耗材，以及圍手術期的護理因動物種屬、研究目的和臨床獸醫的偏好而不同。

有些研究方案可能需隨時間推移而連續采集腦脊液，或需采集未麻醉的受試對象的腦脊液樣本。對于這些方案，可通過長期植入的腦脊液穿刺導管從清醒狀態的恒河猴身上連續采集腦脊液，而該導管可連接至皮下的采集接入口(Gilberto，2003;Gilberto，2022;MacAllister， 2016)。在編寫本文件時，作者盡一切努力尋找總腦脊液體積的數值、硬腦膜穿刺的次數限制或建議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦脊液補充速率相關的最新參考文獻。對于大多數靈長類動物，這方面的文獻很有限。此外，采集方法也各不相同，因為從靈長類獸醫協會成員收集的調查結果表明，各機構均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據現有的最佳證據提供了腦脊液采集的考慮因素和建議。

作為參考，先前的研究已確定成年雄性恒河猴(8.0-10.6kg)的表觀腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速為0.018+/-0.003 mL/min(McCully，2020)。恒河猴的腦脊液形成速率范圍為28.6-44.2 μL/min(Curran，1970;Lux，1975;Martins，1977)。在這方面需要對非人靈長類動物進行進一步的研究，以促進更具指導性建議的制定。

潛在不良反應

雖然在非人類靈長類動物中進行腦脊液采集時報道的并發癥很少，但解剖變異以及不適當或技術不佳的操作方法可能導致樣本受損或并發癥，如出血，腦疝，感染，腦干、脊髓或神經根損傷以及動物的不適。這些并發癥雖然罕見，但可能會損害動物福利。

由于存在風險，應由獸醫或經過培訓的獸醫人員采集腦脊液。對于未成功的腦脊液采集嘗試，實踐可能有所不同。常見做法是允許一個人進行最多三次未成功的嘗試。在第三次嘗試失敗后，應由另一位合格的人員接替。如果第二個人在三次嘗試后仍無法采集到腦脊液，則停止嘗試。同時動物將接受適當的鎮痛治療，并從麻醉中恢復。在嘗試失敗后更換采集部位(例如從腦池到腰椎)通常可成功。如果是未進行成像的失敗嘗試，則可使用X線透視輔助穿刺針放置。除提高成功率外，影像引導還可降低創傷性穿刺的發生率。(Eskey，2001)

術后監測應持續進行，直到動物返回其籠內，并能在沒有支撐的情況下保持直立姿勢。對動物的監測應該至少持續24小時或根據IACUC批準的方案進行。監測應包括對基本的生理、行為和運動參數的評估。尤其應評估動物是否出現神經功能障礙的跡象，包括但不限于嗜睡、抑郁、昏迷和頭部壓迫感等。在人類醫學中，腦脊液采集后出現的頭痛和由此引起的顱內低壓并不少見。考慮到非人類靈長類動物中的這種潛在后遺癥，應在手術時給予鎮痛治療，并延長2-3天，或根據與頭痛或脊柱疼痛相關行為的術后觀察結果按需提供鎮痛治療。最有效的鎮痛方案可能是術前即開始綜合治療。

IACUC注意事項和記錄保存

IACUC應了解腦脊液采集的相關工作以及所有可能的并發癥，并至少每年對其審查。所有相關信息，如藥物劑量、術前準備、采集的腦脊液體積、采集頻率以及術后短期和長期恢復情況，均應在IACUC方案中進行描述，并在醫療記錄或實驗室日志中適當地記錄。腦脊液可能是研究方案中的關鍵資料，但如果采集技術不恰當，可能會對動物福利產生影響。遞交方案時，應提供采集次數和頻率的科學依據。

具體而言，IACUC還應仔細評估涉及腦脊液采集的每個提案，并考慮以下問題：

1.腦脊液采集是否對實現方案中所述的科學目標至關重要?

2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經系統評價方法(如成像技術)可供選擇，如果有，是否考慮過?

3.操作人員是否接受過適當的培訓并具備足夠的技能?

4.是否將提供適當的圍手術期麻醉和鎮痛方案?有關麻醉和鎮痛計劃，應咨詢實驗動物獸醫。

5.采集的腦脊液體積是否符合動物的年齡和體型考慮?

6.腦膜穿刺的次數和頻率是否適合動物，以及并發癥風險是否已降到最低?如果多次采集腦脊液為研究的一部分，應明確規定每只動物的最大采集次數。

7.術后監測計劃是否適當?

8.是否考慮了所有可能的術后并發癥，并列出了所有合理的干預方法，包括安樂死?

來源：實驗動物那些事兒公眾號

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